Freqyency of CYP21 gene mutations in Czech patients with steroid 21-hydroxylase deficiency and statistical comparison with other populations

To undertake mutational analysis in patients with different forms of steroid 21-hydroxylase deficiency. Subjects and CYP21 gene molecular analysis was performed in 76 Czech patients diagnosed with steroid 21-hydroxylase deficiency. Eight of the most common point mutations [intron 2 splice, P30L, 8bp deletion in exon 3, I172N, V281L, Q318X, R356W, and P453S] were analyzed using an amplification-created restriction site method, and 5 additional mutations [intron 7 splice, F307insT, cluster in exon 6, R484P, and R484X] were analyzed using dot-blot hybridization with 5'-biotin-labeled oligonucleotides. Deletions and conversions were screened using a sequence-specific oligonucleotide hybridization method. Comparison of common mutation frequencies in CYP21 reported for different regions, both within Europe and worldwide [North and South America, Asia, and North Africa], was undertaken and the significance of the differences was determined by statistical analysis [Fisher's F test, Student's t test, paired t test, and confidence intervals] using a value of p < 0.05. The most frequent genetic defect found in this group of Czech patients was intron 2 splice mutation [46.7%]. Comparison of mutation frequencies between Czech and other European populations showed that the Czech patients had a lower frequency of deletions/large gene conversions, R356W, and cluster mutations in exon 6, together with a higher frequency of intron 2 splice mutation, 8-bp deletion and F307insT compared with other populations. A high prevalence of P30L mutations, mostly associated with nonclassical forms of congenital adrenal hyperplasia, was found in Czech patients with classic simple virilizing forms of steroid 21-hydroxylase deficiency

Analisis molecular de las mutaciones más frecuentes asociadas a la hiperplasia suprarrenal congenita por deficit de la enzima 21 hidroxilasa / Molecular analysis of the most frequent mutations associated with congenital adrenal hyperplasia secondary to 21-hydroxylase enzyme deficiency

El 90 porciento de los casos de HSC se deben al déficit de la enzima P450c21. En el humano ha sido descripto un gen activo que codifica para la enzima 21 hidroxilasa, el CYP21B, y un gen no funcional denominado CYP21A. Estos genes, ubicados en el brazo corto del cromosoma 6, presentan una hemología entre sí del 98 porciento. La alta homología entre los genes CYP21 y la complejidad de este locus génico, dificulta su análisis a nível molecular y la interpretación de los resultados obtenidos. El objetivo del presente estudio fue elaborar una estrategia adecuada para la caracterización de las alteraciones más frecuentes descripta del gen CYP21B. Se analizaron 77 individuos con diagnóstico clínico y bioquímico de HSC por déficit de la enzima P450c21, pertenecientes a 73 familias no relacionadas (146 cromosomas). La estrategia elaborada permitió diferenciar pacientes con mutaciones puntuales (MP) homocigotas, pacientes con MP en un alelo y deleciones o conversiones en el otro, o pacientes con MP en un alelo y las MP Ex3 o Cluster Ex6 en el otro, aun cuando los progenitores del paciente no estuvieran disponibles para el estudio. Por otro lado, permitió discriminar deleciones o conversiones heterocigoticas de duplicaciones del gen no funcional CYP21A, así como deleciones de los genes CYP21A y B, de un número de copias normales de estos genes. Un análisis exhaustivo del conjunto de los resultados obtenidos en el análisis molecular de este gen resulta indispensable para efectuar una caracterización adecuada de las alteraciones presentes en este locus.

Hiperplasia adrenal congénita no clásica: deficiencia de 21-hidroxilasa / Non classic congenital adrenal hyperplasia: 21-hydroxylase deficiency

Los síndromes de hiperandrogenismo de diferente grado constituyen un motivo de consulta frecuente en un consultorio de Ginecología Infantojuvenil. Estos cuadros suelen provocar preocupación en las adolescentes tanto por sus manifestaciones estéticas (hirsutismo, acné, alopecía) como por la presencia de alteraciones del ciclo mestrual que puede crearles dudas sobre su fertilidad futura. Una de las causas de hiperandrogenismo, la Hiperplasia Adrenal Congénita No Clásica (HACNC), cobra importancia debido a su origen genético y a que no existen elementos de la clínica que permitan diferenciarla de otras etiologías como síndrome de ovarios poliquísticos. El presente trabajo propone una actualización sobre HACNC, en cuanto a su fisiopatología, aspectos genéticos, clínica, metodología diagnóstica y tratamiento. Se consideran en forma particular sus posibles repercusiones sobre la fertilidad, así como el asesoramiento genético que requieren estas pacientes

Detección de la deficiencia de 21 hidroxilasa en su forma no clásica en una población argentina de 100 niñas con pubarquia precoz / Detection of non classical 21-O-Hase deficiency in an argentinean population of 100 girls with precocious pubarche

Antecedentes: el déficit no clásico de 21 hidroxilasa es una alteración de la esteroideogénesis adrenal que puede expresarse como pubarquia precoz en la infancia. Para analizar la prevalencia de ésta diferencia en una población argentina con pubarquia precoz, se estudiaron 100 niñas (edad cronológica: 6,55ñ1,62 años) con aparición de vello púbico antes de los 8 años de edad. Métodos: se evaluaron la talla, la edad ósea (EO) y el grado de desarrollo (Tanner). Se efectuó una prueba de estimulación adrenal con ACTH 0,25 mg i.v., determinando 17OH progesterona y cortisol basales y a los 60 min. Los resultados se compararon con el monograma de María New et al. Se midieron las concentraciones basales de sulfato de dehidroepiandrosterona (SDHEA), androstenediona (A), testosterona (T) y proteína ligadora de hormonas sexuales (SHBG). Resultados: clínicamente se distinguieron 2 grupos, 82 niñas con pubarquia precoz aislada (PPA) y 18 con pubarquia precoz asociada con hipertrofia de clítoris (PPH). Tres pacientes PPA y dos PPH presentaron concentraciones elevadas de 17OHP lo que permitió efectuar el diagnóstico de hiperplasia suprarrenal de comienzo tardío. El resto de las pacientes se diagnosticó como pubarquia precoz idiopática. Las concentraciones de T, A y SDHEA en las pacientes con pubarquia precoz idiopática estuvieron en los límites puberales normales, mientras que las concentraciones de SHBG se encontraron en el límite prepuberal. Conclusiones: en nuestra población estudiada se encontró un 5 por ciento de déficit no clásico de 21-hidroxilasa. Esto indicaría la necesidad de solicitar la prueba de estimulación con ACTH en niñas con pubarquia precoz para la detección de ésta deficiencia enzimática

Report of 285 patients with congenital adrenal hyperplasia and evaluation of approximate prevalence of the disease in Iran

In this study, 285 cases of congenital adrenal hyperplasia who were followed in the Tehran University Hospitals and Institute of Endocrinology and Metabolism are reported. Among these cases, 165 [57.9%] were female and 120 [42.1%], male. The most common type of congenital adrenal hyperplasia in these patients was the salt-losing type of 21-hydroxylase deficiency [57.9%]; 11-hydroxylase deficiency was present in 13.68% of patients. There were only 3 cases with 3-beta hydroxysteroid dehydrogenase deficiency, 2 cases with 17-alphahydroxylase deficiency and one with 20, 22 desmolase deficiency. Presenting complaints were in decreasing order of frequency: ambiguous genitalia, vomiting and dehydration, precocious puberty, hypertension, failure to thrive, hirsutism and primary amenorrhea. The age of patients at the time of diagnosis was between 2 days to 17 years and the most common age was in the first two years of life especially in the neonatal period. A positive family history of the same disease was present in 17 siblings of our patients. [21-OHD = 14 H-OHD = 3]. There were 27 cases of death among these patients [23 male and 4 female that 24 cases had 21-OHD and 2 cases had 3 beta HSD deficiency and one case had 20,22-desmolase deficiency]

Diagnóstico molecular de hiperplasia suprarrenal congénita por déficit de 21-hidroxilasa, variedad perdedora de sal, en población chilena / Molecular diagnosis of salt wasting congenital adrenal hyperplasia, caused by deficit of 21-hydroxylase, in the Chilean population

Twenty five patients with salt wasting congenital adrenal hyperplasia, that had 17-hydroxyprogesterone levels above 30 ng/ml, were studied. In all patients, a polymerase chain reaction (PCR) with selective primers was done with extracted genomic DNA, to amplify the active gene and specific primers for normal or mutated alleles of 50 chromosomes of the 25 patients. The higher frequency affected the ASIn2 in 26 percent of cases, followed by mutations Arg357Trp in 22 percent of cases and Gln319Stop in 12 percent and deletion in 12 percent. The frequent genotypes were homozygosity for ASIn2 (16 percent), homozygosity for Arg357Trp (12 percent) and the homozygote deletion of the gene in 12 percent. The most frequent mechanisms of genetic deficiency of 21-hydroxylase were the mutations ASIn2 Arg357Trp. This type of studies allows prenatal diagnosis and genetics counseling

Tratamiento de la hiperplasia suprarrenal virilizante por deficiencia de la 21-hidroxilasa / Treatment of the virility supradrenal hyperplasia caused by 21-hydroxilase deficiency

El oportuno y adecuado manejo médico de la HSRV por deficiencia de la 21-OH, permite que estos pacientes sobrevivan el período de recién nacido y el primer año de vida. En la peri o pospubertad es frecuente observar signos de hiperandrogenismo que no responden al tratamiento clásico de cortisol a dosis fisiológica y qye es posible controlar con dexametasona (Dex) 0,25 a 0,50 mg nocturna sin efectos colaterales importantes. En este artículo se revisan los criterios actuales de control del tratamiento y se plantea el tratamiento prenatla, cuando existen los recursos adecuados para hacer el diagnóstico prenatal de HSRV, informándose a la madre que ya ha tenido un hijo afectado, que la terapia con Dex 20 ug/kg iniciado en la 5ta. semana de gestación permite evitar o disminuir la malformación intrauterina de los genitales externos de un feto femenino con def de 21-OH

Alteraçöes eletrencefalográficas em pacientes com hiperplasia supra-renal congênita secundária à deficiência da 21-hidroxilase / Electroencephalographic changes in patients with congenital adrenal hyperplasia due to 21-hydroxylase deficiency

Alteraçoes eletrencefalográficas têm sido detectadas em crianças com pubarca precoce. Esse achado poderia ser o reflexo da presença atual ou passada de patologia do sistema nervoso central ou consequencia do nível aumentado de esteróides sexuais. Com o objetivo de testar essa última hipótese, submetemos à avaliaçao eletrencefalográfica 10 pacientes (7F, 3M) com hiperplasia supra-renal congênita (HSRC) por deficiência da 2l-hidroxilase, 4 deles com a forma clássica e 6 com a forma nao-classica da doença. O exame neurológico tradicional foi realizado em 7 pacientes, sendo normal em todos, enquanto o exame neurológico evolutivo diagnosticou distúrbio de hiperatividade e déficit de atençao em dois. Em outro paciente, dados de história foram compatíveis com retardo do desenvolvimento neuropsicomotor. A avaliaçao cletrencefalográfica, quantitativa com mapeamento cerebral nos pacientes com idade superior a 3 anos (n=9), e tradicional no restante, foi considerada, anormal para a idade em 8 pacientes (80 por cento), sendo o traçado em 7 casos caracterizado como lento. A alta frequência de alteraçoes eletrencefalográficas nessa amostra, bem como na pubarca precoce, sugere que esses achados sejam secundários à presença de níveis androgênicos elevados em faixa etária inapropriada e alerta para a importância da avaliaçao e acompanhamento neorológico de crianças portadoras de HSRC.

Diagnóstico e prevalência da hiperplasia adrenal congênita forma näo clássica em uma amostra de 122 pacientes hirsutas / Diagnosis and prevalence of nonclassical congenital adrenal hyperplasia in 122 hirsute patients

OBJETIVOS: Estabelecer o diagnóstico de HAC-NC e a prevalência desta patologia no nosso meio, em pacientes consultando por hirsutismo. PACIENTES E MÉTODOS: Foram avaliadas do ponto de vista clínico e hormonal 122 pacientes hirsutas. A avaliaçao hormonal incluiu a realizaçao sistemática do teste do ACTH em todas as pacientes. Os dados foram comparados com um grupo controle constituído por 13 mulheres normais, nao hirsutas e com um grupo de 5 heterozigóticas obrigatórias para a deficiência da P45Oc21, maes das pacientes. RESULTADOS: Nove pacientes tiveram o diagnóstico de HAC-NC por déficit na P45O-c21 e 1 por deficiência na P45O-c11. O perfil clínico e hormonal apresentou grande variabilidade entre as 9 pacientes, incluindo os níveis basais de 17-hidroxiprogesterona, que foram normais em 2 delas. A paciente com deficiência na P45O-c11 era normotensa, com acne severa e moderadamente hirsuta, sem outros sinais de virilizaçao. Esta paciente apresentou níveis moderadamente elevados de 17-hidroxiprogesterona em resposta ao ACTH e o diagnóstico foi confirmado pela resposta aumentada do 11 deoxi-cortisol ao estímulo corticotrófico. Na amostra estudada de 122 pacientes hirsutas, a prevalência encontrada para a HAC-NC por deficiência da P45O-c21 foi de 7,4 por cento.

Molecular analysis of CYP21 and C4 genes in Brazilian families with the classical form of steroid 21-hydroxylase deficiency

The most common enzymatic defect of steroid synthesis is deficiency of the adrenal steroid 21-hydroxylase. Inhibition of the formation of cortisol results in an increased pituitary release of ACTH which in turn drives the adrenal cortex to overproduce androgens. This hormonal setting affects the development of genetic females by misdirecting the differentiation of external genitalia towards the male type. Since the isolation of the gene encoding 21-hydroxylase enzyme in 1984, gene deletions, large gene conversions, and microconversions have been reported to be responsible for the disease. In this paper, we report a study of this genetic defect in 22 families with one or more affected offspring diagnosed as having the classical form of congenital adrenal hyperplasia. The DNA from 30 patients was analyzed with three restriction enzymes. Hybridization with a 21-hydroxylase cDNA probe and the 5' end of a C4 genomic probe disclosed gene deletion in 7.3 percent (3/41) of the disease-related chromosomes. The rate of large gene conversion was 17.1 percent (7/41), and no abnormality in the hybridization pattern was observed in 75.6 percent (31/41) of the disease alleles. Densitometry of the autoradiographs was used to determine the ratio of the copy-number of the 2 1-hydroxylase gene (CYP21B) to the copy-number of its pseudogene (CYP21A). Differences in phenotype, the low frequency of gene deletion, and the high frequency of gene conversion compared with other studies in different populations indicated that 21-hydroxylase deficiency in the Brazilian population may involve different molecular mutations.

O espectro clínico e laboratorial da forma näo clássica de hiperplasia adrenal congênita por deficiência da 21-hidroxilase / The clinical and laboratorial spectrum of the non-classic way of congenital adrenal hyperplasia by 21-hydroxilase deficiency

Foram estudadas 9 pacientes portadoras da forma nao clássica de hiperplasia adrenal congênita por deficiência de 2l-hidroxilase (2l-FNC). O diagnóstico baseou-se na resposta da 17-hidroxiprogesterona (l7-OHP) 60 minutos após estímulo com 250 ug de ACTH sintético por via EV. Em relaçao à reserva de glicocorticóide, observamos somente uma paciente com resposta deficiente de cortisol ao estímulo com ACTH. A concentraçao basal de 17-OHP foi altamente variável, tanto em relaçao a mesma paciente como entre as pacientes. Em duas delas, observamos concentraçao basal de 17-OHP normal, após estímulo com ACTH, observamos uma hiperresposta de 17-OHP, compatível com o diagnóstico de 2l-FNC. As pacientes foram subdivididas em três grupos de acordo com o diagnóstico clínico: Grupo I: Pubarca precoce (n= 1); Grupo II: Hirsutismo com ciclos menstruais regulares e ovulatórios (n= 4); e Grupo III: Hirsutismo com alteraçao menstrual (n= 3). Nao observamos qualquer diferença entre os três grupos tanto em relaçao à reserva de glicocorticóide adrenal e a concentraçao de 17-OHP, basal ou pós-estímulo, nem com relaçao à parâmetros clínicos, como obesidade, menarca ou idade de início do hirsutismo nas pacientes dos grupos II e III, sugerindo que a manifestaçao clínica da 2l -FNC esteja na dependência de fatores extra-adrenais, excetuando-se a pubarca precoce.

Critérios diagnósticos das formas näo-clássicas de hiperplasia adrenal congênita / Diagnostic criteria of non-classic forms of congenital adrenal hyperplasia

A hiperplasia adrenal congênita (HAC) resulta de deficiência herdada em uma das várias enzimas necessárias para a síntese do cortisol. Deficiência na produçao de cortisol é comum a todas as formas de HAC, em decorrência da deficiência enzimática. Devido à existência de um mecanismo de feedback negativo entre a hipófise anterior e a supra-renal, ocorre aumento da secreçao de ACTH. Dependendo da severidade da deficicência enzimática, a concentraçao sérica de cortisol pode ou nao ser normalizada; porém sempre acompanhado de elevaçao dos esteróides precursores, resultando, nas formas clássicas de HAC, de alteraçoes bioquímicas e fenotípicas. O grau do bloqueio determina qual precursor estará elevado, enquanto que a severidade da deficiência enzimática determinará a extensao do comprometimento clínico. A forma nao-clássica da HAC diferencia-se da forma clássica pelo fato de os indivíduos afetados manifestarem sinais e sintomas de excesso androgênico tardiamente, ma infância ou adolescência, através de um espectro clínico variável, como pubarca precoce, acne, hirsutismo, distúrbio menstrual e infertilidade, podendo até mesmo nao manifestar sintomas, na chamada forma críptica da doença. O diagnóstico da forma nao-clássica de HAC, em geral, nao pode ser feito levando-se em consideraçao apenas a concentraçao basal dos hormônios esteróides, uma vez que estes podem se encontrar normais ou em concentraçao similar à das demais síndromes hiperandrogênicas. A dosagem dos hormônios esteróides após estímulo com ACTH sintético é o método que se impoe para o diagnóstico. Entretanto, os critérios diagnósticos ainda nao se encontram estabelecidos.

Forma näo clássica da deficiência de 21-hidroxilase com virilizaçäo após a menopausa / Non classic form of 21-hydroxylase deficiency with virilization after menopause

Relatamos o caso de uma paciente de 52 anos com quadro de hiperandrogenismo de início no climatério. Devido a suspeita prévia da origem ovariana do hiperandrogenismo havia sido submetida, há um mês, a ooforectomia direita evoluindo com persit6encia dos sintomas. Sua história clínica anterior tivera início sete anos após histerectomia e ooforectomia esquerda. Anteriormente à segunda cirurgia apresentava níveis elevados de testosterona (320ng/dl) e a avaliaçao anatômica através de TC e US nao evidenciou massas tumorais em adrenais ou ovários. A cateterizaçao intra-operatória da veia ovariana revelou níveis praticamente normais de testosterona (107ng/dl), mas concentraçao periférica bastante elevada (368ng/dl). Na reavaliaçao pós-cirúrgica os níveis de 17-OHP (570 para 12ng/dl), SDHEA (178 para 60 ug/dl), androstenediona (240 para 38 ng/dl) e testosterona (193 para 110 ng/dl) suprimiram em resposta à dexametadona (2mg x 2 dias). Dosagem de 17-OHP na amostra da veia ovariana mostrou níveis de 14.680 ng/dl. Estudo do HLA confirmou a presença do haplotipo HKA-B14 na paciente e em 2 de seus 4 filhos. A instituiçao do tratamento com prednisona resultou em melhora clínica evidente dos sintomas. Apesar de sua manifestaçao ser mais prevalente na faixa peripuberal a forma nao clássica da deficiência de 21-hidroxilase deve ser lembrada durante investigaçao de hirsutismo/virilizaçao na idade adulta, e mesmo na pós-menopausa. (Arq Bras Endocrinol Metab 1994; 38/1:29-34).

Adrenal response to adrenocorticotropin hormone and HLA typing of subjects with different degrees of 21-hydroxylase deficiency

1. To evaluate different degrees of 21-hydroxylase (21-OH) deficiency we studied the 17-hydroxyprogesterone (17-OHP) and cortisol response to the adrenocorticotropin hormone (ACTH) stimulation test. In a study of 13 families we characterized the relatives of patients with classical 21-OH deficiency using HLA antigen typing and the ACTH test. The subjects were divided into five groups: 12 patients with the classical form, 11 patients with the nonclassical form, 38 heterozygotes, 6 normal homozygotes and 33 controls. 2. The 17-hydroxyprogesterone response to ACTH (mean +/- SD) varied as follows according to the degree of 21-OH deficiency: 25442 +/- 15718 ng/dl for the classical group, 4198 +/- 1637 ng/dl for the nonclassical group, 348 +/- 267 ng/dl for the heterozygotes, 127 +/- 81 ng/dl for normal homozygotes, and 164 +/- 120 ng/dl for the controls. Basal plasma cortisol did not differ among the five groups. The cortisol response to ACTH was not different among controls (30 +/- 8 micrograms/dl), normal homozygotes (28 +/- 7 micrograms/dl) and heterozygotes (26.5 +/- 7 micrograms/dl). The cortisol response was decreased in the patient groups and was lower in the classical (14 +/- 10 micrograms/dl) than in the nonclassical group (20 +/- 4 micrograms/dl). 3. In most families (11/13), HLA typing was informative in identifying the 21-OH deficiency containing haplotype, which correlated with the hormonal profile. In two families there was no correlation between the HLA genotype and the clinical expression of 21-OH activity for two HLA identical pairs of siblings